熒光濾光片在熒光顯微鏡的用途

2022-01-18 10:01:26 NMOT

我們都知道熒光顯微鏡是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。

熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。

為了讓熒光顯微鏡能夠更好的檢測(cè)，需要在熒光顯微鏡里安裝三種濾光片分別是：

（a）激發(fā)濾光片;

（b）發(fā)射濾光片;

（c）二色分束鏡;

激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片是一種帶通濾光片，它傳輸對(duì)應(yīng)于相應(yīng)熒光團(tuán)吸收或發(fā)射光譜的波長(zhǎng)范圍，同時(shí)阻擋任何一側(cè)的外來(lái)光。如果希望圖像亮度高于對(duì)比度，則發(fā)射濾光片也可以是長(zhǎng)波通濾光片，它不是阻塞而是傳輸更長(zhǎng)的波長(zhǎng)。大多數(shù)二色分光鏡是設(shè)計(jì)用于45°入射角（AOI）。二向色濾光片將濾過(guò)的激發(fā)光導(dǎo)向樣品，并將樣品的發(fā)射光束通過(guò)發(fā)射濾光片導(dǎo)向CCD檢測(cè)器。

熒光濾光片組可以是單波段或多波段，并且可以存在于多種配置中，最常見(jiàn)的是熒光濾光片立方體和濾光片輪。單波段濾光片組可用于查看標(biāo)記有多個(gè)熒光團(tuán)的樣本，方法是使用每個(gè)相應(yīng)的濾光片立方體拍攝一系列圖像，然后創(chuàng)建最終的合成圖像。這也可以通過(guò)使用Pinkel濾光片或Sedat濾光片輪配置來(lái)實(shí)現(xiàn)。Pinkel濾光片組由多波段發(fā)射濾光片和多向?yàn)V光片組成，它們與多個(gè)單波段激發(fā)濾光片一起使用。Sedat濾光片組包含一個(gè)多向?yàn)V光片，該濾光片單獨(dú)與多個(gè)單波段激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片一起使用。全多波段濾光片組由多波段激發(fā)濾光片、多波段發(fā)射濾光片和多向?yàn)V光片組成，可生成包含所有熒光標(biāo)記的單個(gè)圖像。

濾光片的作用